Выявление генетических маркеров устойчивости к макролидам в клинических изолятах Mycoplasma genitalium в Республике Беларусь за период с марта 2022 по март 2024 года

Abstract

Цель. Изучить распространенность и спектр маркеров резистентности к макролидам в изолятах Mycoplasma genitalium, выделенных от пациентов из областных центров Республики Беларусь, обратившихся за медицинской помощью в лечебно-профилактические учреждения за период с марта 2022 по март 2024 года. Материалы и методы. 322 образца ДНК Mycoplasma genitalium из трех областных центров (Брест, Витебск, Минск) Республики Беларусь исследовали на наличие маркеров резистентности к макролидам с помощью разработанной технологии полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, которая позволяет выявлять любые нуклеотидные замены в гене 23S pPHK M. genitalium в позициях 2058, 2059, 2611 (согласно нумерации E. coli). Для подтверждения характера нуклеотидных замен все образцы, несущие мутации, были дополнительно исследованы методом секвенирования по Сэнгеру. Результаты. За период с марта 2022 по март 2024 года по Республике Беларусь частота распространения мутаций резистентности к макролидам у M. genitalium составила 15,22% (49/322). Мутационный профиль представлен 2 вариантами нуклеотидных замен V домена 23S pPHK M. genitalium: позиция A2059G – 10,25% (33/322) и A2058G – 4,97% (16/322). Распространенность макролидорезистентности и мутационный профиль у M. genitalium по областным городам Беларуси составили: Минск – 20,6% (41/199) с мутациями в позициях A2059G – 14,57% (29/199) и A2058G – 6% (12/199); Брест – 5% (5/90) с мутациями в позициях A2059G – 4% (4/90) и A2058G – 1% (1/90); Витебск – 9% (3/33) с мутациями в позициях A2058G – 6% (2/33) и A2059G – 3% (1/33). Количество выявленных мутаций в позиции A2059G преобладает над A2058G в два раза. Такое количественное соотношение между выявленными генетическими детерминантами макролидорезистентности (A2059G и A2058G) характерно как для отдельных областных центров, так и для республики в целом. Распространенность маркеров резистентности к макролидам у M. genitalium в различных гендерных группах составила: в женской популяции – 15,56% (35/225), в мужской популяции – 14,43% (14/97). Различий в мутационном спектре у M. genitalium, выделенной от женщин и мужчин, не выявлено. В обеих группах преобладает один и тот же вариант в позиции A2059G. Результаты депонированы и импортированы на онлайн-платформу для анализа и обмена данными антибиотикорезистентности AMRcloud. Заключение. Полученные в рамках выполнения в России многоцентрового проекта DeMaRes (Detection of Macrolide Resistance – Mycoplasma genitalium) данные являются первыми результатами, демонстрирующими актуальность проблемы антибиотикорезистентности у M. genitalium для Республики Беларусь. Обнаруженные мутации подчеркивают необходимость внедрения методов молекулярной диагностики (ПЦР) в практику рутинного тестирования всех M. genitalium-положительных образцов на наличие мутаций устойчивости к макролидам.

Purpose. To study the prevalence and spectrum of macrolide resistance markers in Mycoplasma genitalium isolated from patients of three regional centers (Brest, Vitebsk, and Minsk) of the Republic of Belarus who sought medical care in medical institutions for the period from March 2022 to March 2024. Materials and methods. A total of 322 DNA samples of Mycoplasma genitalium from three regional centers (Brest, Vitebsk, Minsk) of the Republic of Belarus were tested for the presence of macrolide resistance markers using an elaborated real-time polymerase chain reaction technique allowing to detect any nucleotide substitutions in 23S pPHK gene of M. genitalium at positions 2058, 2059, and 2611 (according to numbering by E. coli). To confirm the nature of the nucleotide substitutions, all M. genitalium DNA samples carrying mutations were further tested by Sanger sequencing. Results. For the period from March 2022 to March 2024 in the Republic of Belarus the frequency of distribution of macrolide resistance mutations in M. genitalium was 15.22% (49/322). The mutation profile is represented by 2 variants of nucleotide substitutions of the V domain of 23S rRNA of M. genitalium: position A2059G 10.25% (33/322) and position A2058G 4.97% (16/322). The prevalence of macrolide resistance and mutational profile in M. genitalium in regional centers of Belarus were as follows: in Minsk 20.6% (41/199) with mutations in two positions, A2059G 14.57% (29/199) and A2058G 6% (12/199), in Brest 5% (5/90) with mutations in positions A2059G 4% (4/90) and A2058G 1% (1/90), and in Vitebsk 9% (3/33) with mutations in two positions, A2058G 6% (2/33) and A2059G 3% (1/33). The number of detected mutations in position A2059G is twofold more frequent than in A2058G. Such a quantitative ratio between the identified genetic determinants of macrolide resistance (A2059G and A2058G) is typical both for particular regional centers and for the Republic as a whole. The prevalence of macrolide resistance markers in M. genitalium in gender groups was as follow: 15.56% (35/225) in the female population, and 14.43% (14/97) in the male population. No differences in the mutation spectrum were found in M. genitalium isolated from women and men. The same variant in position A2059G prevails in both groups. The results were deposited and imported to the online platform for analysis and exchange of antibiotic resistance data AMRcloud (https://amrcloud.net/ru/project/demares/). Conclusion. The data obtained within the framework of the multicenter project DeMaRes (Detection of Macrolide Resistance – Mycoplasma genitalium) in Russia are the first results demonstrating the relevance of M. genitalium antibiotic resistance issue for the Republic of Belarus. The detected mutations emphasize the need for implementing molecular diagnostic methods (PCR) into routine testing of all M. genitalium-positive samples for the presence of macrolide resistance mutations.