Использование рекомбинантных полипептидов ORF2 и ORF3 3-го генотипа вируса гепатита Е при разработке тест- системы иммуноферментного анализа для серодиагностики иммуноглобулинов класса G

Abstract

В статье приведены результаты использования в качестве иммобилизированных антигенов рекомбинантных полипептидов, содержащих белковые продукты открытых рамок считывания генов ORF2 и ORF3 вируса гепатита Е (ВГЕ) 3-го генотипа (разработаны и предоставлены ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия), разведенных в карбонатно-бикарбонатном буфере до рабочей концентрации 2 и 0,25 мкг/мл соответственно. Установлено, что иммуносорбент одинаково хорошо взаимодействует с иммуноферментными конъюгатами тест-систем Вектогеп Е-IgG («Вектор-Бест», Новосибирск) и «ДС-ИФА-АНТИ-HEV-G» (НПО «Диагностические системы», РФ), что может использоваться для адаптации тест-систем ИФА в зависимости от целей исследования. Для оценки показателей внутрисерийной воспроизводимости были исследованы одна низко- и две высокопозитивные по содержанию анти-ВГЕ IgG сыворотки пациентов в нескольких повторах. Показатели коэффициента вариации не превышали рекомендуемую величину в 10%. При этом более специфичной в отношении низкопозитивных по анти-ВГЕ IgG сывороток крови людей является комбинация ORF2 и ORF3 2,0 и 0,25 мкг/мл и конъюгата тест-системы «ДС-ИФА-АНТИ-HEV-G», что определяет ее преимущественное использование в дальнейшем.

The article presents the results of using recombinant polypeptides containing protein products of the open reading frames of the ORF2 and ORF3 genes of the hepatitis E virus (HЕV) of the 3 rd genotype as immobilized antigens (developed and provided by FSBSI "Scientific Research Institute of Vaccines and Serums I.I. Mechnikov", Moscow, Russian), diluted in a carbonate-bicarbonate buff er to a working concentration of 2 and 0.25 μg/ml. It was found the immunosorbent interact equally well with enzyme immunoassay conjugates of the Vectohep E-IgG test systems (Vector-Best, Novosibirsk) and DS-ELISA-ANTI-HEV-G (NPO Diagnostic Systems, RF), which can be used for adaptation ELISA test systems in depending on the objectives of the study. To assess the indicators of in-series reproducibility, one low- and two high-positive anti-HЕV IgG sera of patients in several repeats were studied. The coefficient of variation when using the immunosorbent did not exceed the recommended value of 10%. At the same time, the combination of ORF2 and ORF3 2.0 μg/ml and 0.25 μg/ml with the conjugate DS-ELISA-ANTI-HEV-G is more specific for low-positive anti-HЕV IgG human blood sera, which determines its preferential use in the future.