Влияние мезенхимальных стромальных клеток, их микровезикул и плазмы, обогащенной растворимыми факторами тромбоцитов, на патологические изменения в ткани поджелудочной железы при остром некротизирующем панкреатите у крыс

Abstract

Актуальность. Улучшение результатов лечения острого некротизирующего панкреатита (ОНП) остается наиболее сложной и нерешенной проблемой для хирургов и специалистов интенсивной терапии. Цель. Оценить влияние мезенхимальных стромальных клеток (МСК), их микровезикул (МВ) и плазмы, обогащенной растворимыми факторами тромбоцитов (ПОРФТ), на морфологическую и иммуногистохимическую характеристику поджелудочной железы при ОНП у крыс в зависимости от пути и времени введения, а также раздельного и сочетанного применения. Материал и методы. Изучено влияние МСК, МВ МСК и ПОРФТ на морфологическую и иммуногистохимическую характеристику поджелудочной железы (ПЖ) при ОНП у крыс в зависимости от пути (региональный/внутривенный) и времени введения (6 и 24 часа от начала моделирования заболевания), а также их раздельного или сочетанного применения (ПОРФТ и МСК, ПОРФТ и МВ МСК). Исследование проведено на 72 половозрелых крысах-самцах линии Wistar. Модель острого некротизирующего панкреатита создавали стандартно введением 0,3 мл 5% неионного детергента полиэтиленгликоль-октилфенолового эфира в хвостовую часть ПЖ крыс. Забор органов и тканей производили на 3-и сутки от начала моделирования заболевания. Гистологические изменения в тканях ПЖ изучались путем окрашивания препаратов гематоксилином и эозином. Иммуногистохимическое окрашивание ткани ПЖ выполняли первичными моноклональными антителами к TGF-β1 и SCARD1 с последующим анализом характера их экспрессии. Результаты. Было установлено, что более выраженные процессы регенерации и неоангиогенеза наблюдались при внутривенном способе доставки МСК и МВ МСК независимо от времени введения (6 или 24 часов). Полученные данные указывают на иммуномодулирующий и прорегенераторный эффект МСК и МВ МСК путем потенцирования поляризации от воспалительных макрофагов М1 к противовоспалительным М2, о чем свидетельствует выраженная иммуногистохимическая реакция к TGF-β1, который секретируется преимущественно макрофагами фенотипа М2. Заключение. Применение в эксперименте МСК и МВ МСК для лечения ОНП на ранних стадиях заболевания обеспечивает более выраженные процессы репарации и неоангиогенеза в патологически измененной ткани ПЖ.

Background. Improving treatment outcomes for acute necrotizing pancreatitis (ANP) remains the most difficult and unresolved problem for surgeons and intensive care specialists. Objective. To evaluate the effect of mesenchymal stromal cells (MSCs), MSC-derived microvesicles (MSC MVs) and platelet-rich plasma (PRP) on morphological and immunohistochemical characteristics of the pancreas in ANP in rats with regard to the route and timing of PRP administration, as well as separate and combined application. Material and methods. The effects of MSCs, MSC MVs and PRP on the morphological and immunohistochemical characteristics of the pancreas in ANP in rats were studied, taking into the account the route (intraperitoneal/intravenous) and time of administration (6 and 24 hours from the start of disease modeling), as well as their separate or combined use (PRP and MSCs, PRP and MSC MVs). The study was conducted on 72 adults Wistar rats. Acute pancreatitis was induced by the administration of a 0.3 ml of 5% solution of non-ionic polyethylene glycol octylphenol ether detergent into the caudal part of the rat pancreas. Organ and tissue sampling was performed on the 3 rd day from the beginning of the disease modeling. Histological changes in pancreatic tissues were studied by hematoxylin and eosin staining the preparations. Immunohistochemical staining of pancreatic tissue with anti-TGF-β1 and anti-SCARD1 primary monoclonal antibodies was performed followed by studying the nature of their expression. Results. A comparative assessment of the effects of MSCs, MSC MVs and PRP on the histomorphological and immunohistochemical changes in pancreatic tissue in ANP in rats, found that more pronounced regeneration and neoangiogenesis processes were observed with the intravenous delivery of MSCs and MSC MVs, regardless of the timing of administration (6 or 24 hours from the onset of the disease). The obtained data suggested the immunomodulatory and pro-regenerative effects of MSC and MSC MVs produced by potentiating the polarization from inflammatory M1 macrophages to anti-inflammatory M2, as evidenced by a pronounced immunohistochemical reaction to TGF-β1, which is secreted predominantly by macrophages of the M2 phenotype. Conclusion. The experimental use of MSCs and MSC MVs to treat АNP at early stages of the disease provides more pronounced processes of repair and neoangiogenesis in pathologically altered pancreatic tissue.