Первый опыт получения микроРНК из нефиксированной ткани щитовидной железы в Республике Беларусь

Abstract

МикроРНК (миРНК) – разновидность некодирующих РНК, регулирующих экспрессию множества генов. Показана роль этих молекул в качестве важных диагностических и прогностических маркеров рака различной локализации. До недавнего времени в Беларуси опыт работы с миРНК отсутствовал. Собственное исследование имело целью восполнить этот пробел. Использовано 11 образцов опухолевой ткани, а также 11 образцов нормальной ткани щитовидной железы. Выполнено прямое сравнение двух методов выделения микроРНК – сорбционного, на колонке с кремниевым фильтром (LRU-100-50; Biolabmix, Россия), и экстракционного по Хомчинскому (РНК-ЭКСТРАН; Синтол, Россия). Изучена экспрессия miR-21, miR-31, miR-144, miR-146b, miR-181b, miR-187, miR-199b, miR-200а, miR-200b, miR-205, miR-221, miR-222, miR-375. В ткани папиллярной карциномы выявлена гиперэкспрессия всех изученных микроРНК; в ткани медуллярной карциномы экспрессия miR-21, miR-31, miR-199b и miR-205 была подавлена. Установлена значимая корреляция (r = 0,773, р = 0,00000368, R2 = 0,627) показателей экспрессии микроРНК при использовании обоих методов, однако применение сорбционного метода позволило получить микроРНК с меньшим содержанием посторонних примесей. Разработанная методика предоставляет возможность изучать изменение экспрессии микроРНК в опухолевой ткани по отношению к нормальной ткани щитовидной железы. Имеющиеся расхождения в характере изменения экспрессии микроРНК требуют выполнения дальнейших исследований.

MicroRNAs (miRNAs) are non-coding RNAs that regulate the expression of many genes. Currently, they are important diagnostic and prognostic markers of cancer of various localization. This study is devoted to the description of the first experience of studying miRNA expression in frozen thyroid tissue and a comparative analysis of methods for miRNA isolation. 11 samples of tumor tissue were used, as well as 11 samples of normal thyroid tissue. A direct comparison was made using 2 methods of miRNA isolation - sorption method, on a column with a silicon filter (LRU-100-50; Biolabmix, Russia), and Khomchinsky extraction method (RNK-EXTRAN; Sintol, Russia). The expression of miR-21, miR-31, miR-144, miR-146b, miR-181b, miR-187, miR-199b, miR-200a, miR-200b, miR-205, miR-221, miR-222, miR-375. In the tissue of papillary carcinoma, hyperexpression of all studied miRNAs was revealed; in medullary carcinoma tissue, expression of miR-21, miR-31, miR-199b, and miR-205 was suppressed. A significant correlation was established (r = 0.773, p = 0.00000368, R2 = 0.627) using both methods. The use of the sorption method made it possible to obtain miRNAs with a lower content of foreign impurities. The developed technique makes it possible to study changes in microRNA expression in tumor tissue relative to normal thyroid tissue. The existing discrepancies in the nature of changes in miRNA expression require further studies.