Опыт исследования молекулярных маркёров для оценки состояния нейронов мозга

Abstract

Исследование проведено на крысахв норме и при экспериментальной патологии (холестаз, потомство крыс с холестазом, или потреблявших алкоголь во время беременности, церебральная ишемия). Образцы мозга фиксировали в цинк-этанол-формальдегиде и заключали в парафин. Серийные срезы окрашивали иммуногистохимически для выявления необходимых нейромаркеров. Оценивали нейромедиаторную природу нейронов, выявляя в них специфические ферменты синтеза или деградации нейромедиаторов. Используя маркерKi-67, избирательно визуализацировалиделящиеся предшественники нейронов, маркер даблкортин - мигрирующиепредшественники нейронов, маркер NeuN - зрелые нейроны. Для оценки энергетического потенциала нейронов использовали АТФ-синтазу, депо кислорода - нейроглобин. Для оценки аутофагии в нейронах выявлялиеё активатор AMBRA1. Изучали депонирующий кальций белок, кальбиндин, Наблюдали появление и накопление белка гена быстрого реагирования c-Fos.Для оценки синаптического аппарата мозга использовалимаркер синаптофизин.

The study was conducted on rats in normal and experimental pathology (cholestasis, offspring of rats with cholestasis, or who consumed alcohol during pregnancy, cerebral ischemia). Brain samples were fixed in zinc-ethanol-formaldehyde and enclosed in paraffin. Serial sections were stained immunohistochemically to identify the necessary neuromarkers. The neurotransmitter nature of neurons was evaluated by identifying specific enzymes of neurotransmitter synthesis or degradation in them. Using the Ki-67 marker, dividing precursors of neurons were selectively visualized, the doublecortin marker - migrating precursors of neurons, the NeuN marker - mature neurons. To assess the energy potential of neurons, ATP synthase was used, and oxygen depot - neurooglobin. To assess autophagy in neurons, its activator AMBRA1 was detected. The calcium-depositing protein, calbindin, was studied, and the appearance and accumulation of the c-Fos rapid response gene protein was observed. To assess the synaptic apparatus of the brain, the marker synaptophysin was used.