Разработка отечественной иммуноферментной тест–системы для детекции Anti-Hev IGM в сыворотке крови

Abstract

Введение. Республику Беларусь не относят к странам, высокоэндемичным по вирусному гепатиту Е, при этом многочисленные исследования показали активную циркуляцию вируса гепатита Е (ВГЕ) среди людей и животных, имеющую латентный характер, что затрудняет своевременную диагностику инфекции. Цель исследования. Разработать и оценить качество отечественной иммуноферментной тест-системы для определения анти-ВГЕ IgM. Материал и методы. 96-луночные разборные планшеты, рекомбинантные белки ORF2 и ORF3 ВГЕ 3-го генотипа, пероксидазный конъюгат к IgM человека, растворы для разведения сывороток и конъюгата, содержащие бычий сывороточный альбумин. Результаты. Рекомендуемая концентрация рекомбинантных полипептидов ORF2 и ORF3 ВГЕ 3-го генотипа для сорбции составляет 2 и 1 мкг/мл, соответственно, оптимум разведения конъюгата 1:13 000. Ложноположительных и ложноотрицательных результатов не выявлено, чувствительность и специфичность составляют не менее 99%. Среднее значение коэффициента вариации внутри одного планшета – 6,4%, в пределах двух планшетов – 11,3%. Выводы. Характеристики разработанной национальной тест-системы соответствуют рекомендуемым стандартам, что свидетельствует о возможности ее внедрения в практику клинической лабораторной диагностики.

Background. Though the Republic of Belarus does not belong to countries endemic for viral hepatitis E, numerous studies have proved that hepatitis E virus (HEV) actively circulates among humans and animals. However, the circulation is latent that makes it difficult to diagnose the infection in a timely manner. Objective. To develop and evaluate the quality of a domestic ELISA test system for the detection of anti-HEI IgM. Material and methods. 96-well plates, recombinant proteins ORF2 and ORF3 of the 3rd HEV genotype, conjugate of monoclonal antibodies to human IgM with horseradish peroxidase, solutions for dilution of serums and conjugate containing bovine serum albumin. Results. The recommended concentrations of recombinant polypeptides ORF2 and ORF3 of hepatitis E virus genotype 3 for sorption are 2 and 1 μg/ml, respectively. The optimum dilution of the conjugate is 1:13 000. False positive and false negative results were not detected, sensitivity and specificity being at least 99%. The mean value for coefficient of variation within one plate is 6.4%, within two plates is 11.3%.