Влияние липосомальной формы алтеплазы на эффективность тромболизиса в коронарных артериях при остром инфаркте миокарда

Abstract

Разработана липосомальная (Лип) форма доставки тканевого активатора плазминогена алтеплазы (АлТ). Изучен количественный и качественный состав липосом, их физико-химические характеристики и протеолитическая активность липосомальной формы тромболитика. Установлено, что состав липосом с соотношением фосфатидилхолин / холестерин 1,5 : 1 и липиды / алтеплаза 1 : 1 является оптимальным для лечения острого инфаркта миокарда (ОИМ) в эксперименте. При различных соотношениях компонентов липосомы имели отрицательное значение дзета-потенциала > 30 мВ, что указывает на их агрегативную устойчивость, в том числе и после хранения в течение 2 суток при 20 °С. Липосомы, полученные из соевого осфатидилхолина, обладают большей коллоидной устойчивостью (значение дзета-потенциала ~ –57 мВ) и имеют меньшее значение гидродинамического диаметра (~ 140 нм) по сравнению с липосомами из яичного фосфатидилхолина (~ –35,4 мВ и ~ 220 нм соответственно). Исходное содержание «свободной» АлТ липосом в супернатанте из яичного фосфатидилхолина ЛипЯ (АлТ) составило 15,0 ± 4,0 %, в течение периода инкубации (4 суток) концентрация АлТ уменьшается до 9,0 ± 4,5 %. В случае липосом из соевого фосфатидилхолина ЛипС (АлТ) содержание АлТ в течение периода инкубации увеличивается от 11,0 ± 4,5 до 32,5 ± 6,0 %. Значения протеолитических активностей тканевого активатора плазминогена в составе ЛипЯ (АлТ) и ЛипС (АлТ) зависят от типа фосфатидилхолина. Исходная активность АлТ в ЛипЯ (АлТ) составила 36,0 % и через 1 сутки она увеличилась до 45 %, активность АлТ в ЛипС (АлТ) составила 61,0 %, и через 1 сутки увеличилась до 66,0 %. При использовании липосомальной формы доставки алтеплазы в коронарных артериях крыс с ОИМ отмечается более полный лизис фибрина, в отличие от животных, получающих нативную форму препарата. Разработанная система адресной доставки алтеплазы на основе соевых липосом позволяет (p < 0,05) увеличить более чем на 15 % степень восстановления просвета коронарной артерии по сравнению с действием обычного препарата.

A liposomal (Lip) formulation of tissue plasminogen activator, alteplase (AlT), has been developed. The quantitative and qualitative composition of the liposomes, as well as their physicochemical properties and proteolytic activity, have been studied in relation to the thrombolytic liposomal form. It was determined that a formulation consisting of liposomes with a phosphatidylcholine/cholesterol ratio of 1.5 : 1, and lipids/alteplase ratio of 1 : 1, is optimal for treating acute myocardial infarction (AMI) in experimental models. At different component ratios, liposomes had a negative zeta potential value greater than 30 mV, indicating their aggregative stability, even after storage for two days at 20 degrees Celsius. Liposomes derived from soy phosphatidylcholine showed greater colloidal stability with a zeta potential of approximately –57 mV and a lower hydrodynamic diameter of approximately 140 anometers, compared to liposomes derived from egg phosphatidylcholine, which had a zeta potential around –35.4 mV and a hydrodynamic diameter around 220 nanometers. The initial content of free AlT in the liposome supernatant from egg phosphatidylcholine (Lipeg) was 15.0 ± 4.0 %. During the incubation period of 4 days, the concentration of free AlT decreased to 9.0 ± 4.5 %. In contrast, in liposomes derived from soy phosphatidylcholine (LipS), the content of free AlT increased from 11.0 ± 4.5 % to 32.5 ± 6.0 % over the same incubation period. The value of the proteolytic activity of tissue plasminogen activator (tPA) in the compositions of Lipeg (AlT) and Lips (AlT) depends on the type of phosphatidylcholine. The initial tPA activity in Lipeg (AlT) was 36.0 %, and after 1 day, it increased to 45 %. In Lips (AlT), the initial activity was 61.0 % and increased to 66 % after 1 day. When using the liposomal form of alteplase for delivery into the coronary arteries of rats with acute myocardial infarction (AMI), a more complete fibrin lysis is noted compared to animals receiving the native form of the drug. The developed system of targeted delivery of alteplase using soy liposomes has been shown to significantly improve the degree of coronary artery lumen restoration by more than 15%, compared to the use of a conventional drug (p < 0.05).