Модель токсического фиброза у крыс линии Wistar: морфологичекие и молекулярно-генетические параметры точки перехода в цирроз

Abstract

Аннотация Обоснование. На текущий момент имеются сведения, демонстрирующие ключевое значение микроРНК в фиброгенезе печени, однако использование их в качестве мишеней для ранней диагностики, оценки и прогнозирования фиброза далеко от применения в клинической практике. Ключевую роль в генезе данного патологического процесса отводят ангиогенезу и капилляризации синусоидов, предполагая, что эти морфологические изменения определяют его патогенез и прогноз. Однако исследования в отношении роли микроРНК в патологическом ангиогенезе и капилляризации синусоидов немногочисленны. Цель исследования – изучить динамику уровня микроРНК и мРНК молекулярных мишеней, ассоциированных с патологическим ангиогенезом на фоне токсического фиброза печени; оценить взаимосвязь выбранных молекулярно-генетических показателей с процессами перестройки внутрипечёночного сосудистого русла. Методы. Фиброз и цирроз печени у крыс-самцов линии Wistar индуцировали свежеприготовленным раствором тиоацетамида в течение 17 нед. Уровень микроРНК-19а-3р, микроРНК-29b-3р, микроРНК-29b-1-5p, микроРНК-34b-5р, микроРНК-125b-5р, микроРНК-130a-5p, микроРНК-195-5р, микроРНК-449а-5р, микроРНК-449с-5р, микроРНК-466d, микроРНК-489-3р, микроРНК-495, микроРНК-664-3р, микроРНК-3085, микроРНК-3558-3р в печени определяли методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Результаты. Установлено, что на протяжении всего эксперимента относительный уровень микроРНК варьировал в широком диапазоне значений (10 –3 –10 4 отн. ед.). В большинстве случаев он снижался в точке перехода фиброза в цирроз, при этом рост наблюдали только для микроРНК-29b-3p. Между уровнем микроРНК и количеством междольковых вен, междольковых артерий, синусоидов, площадью соединительной ткани установлены статистически значимые корреляционные связи (р <0,05). Заключение. Совместный анализ морфологических и молекулярно-генетических показателей позволил предположить, что в рамках настоящей экспериментальной модели фиброза и цирроза печени перестройка внутрипечёночного сосудистого русла и прогрессирование фиброза связаны с динамикой уровня ряда исследованных нами микроРНК и мРНК Ang.

Abstract Background: It is known that miRNAs are important in liver fibrogenesis. However, their use as targets for early diagnosis and treatment of fibrosis is far from use in clinical practice. Angiogenesis and sinusoid capillarization are important histological features of the process. Studies regarding the role of miRNAs in pathological angiogenesis and sinusoid capillarization are insufficient. Aim: To study the molecular targets (miRNAs and mRNAs) dynamics of associated with pathological angiogenesis in toxic fibrosis of the liver; to evaluate the relationship of the selected molecular factors to the processes of restructuring the intrahepatic vascular system. Methods: Fibrosis and subsequent cirrhosis of the liver in rats of the Wistar line (males) were induced for 17 weeks by a freshly prepared solution of thioacetamide. The level of miRNA-19а-3р, miRNA-29b-3р, miRNA-29b-1-5p, miRNA-34b-5р, miRNA-125b-5р, miRNA-130a-5p, miRNA-195-5р, miRNA-449а-5р, miRNA-449с-5р, miRNA-466d, miRNA-489-3р, miRNA-495, miRNA-664-3р, miRNA-3085, miRNA-3558-3р in fresh frozen liver samples, was determined by Two-tailed RT-qPCR. Results: In this study, we found that throughout the experiment, the relative level of microRNAs varied in a wide range of values (10–3 –104 rel. units). In most cases, it decreased at the point of transition from fibrosis to cirrhosis, while growth was observed only for microRNA-29b-3p. Statistically significant correlation relationships were established between microRNAs and the number of interlobular veins, interlobular arteries, sinusoids, and the area of connective tissue (p <0.05). Conclusion: A joint analysis of morphological and molecular-genetic parameters allowed us to suggest that within the framework of the current experimental model of liver fibrosis and cirrhosis, the restructuring of the intrahepatic vascular bed and the progression of fibrosis are associated with the dynamics of the level of a number of microRNAs that we studied and Ang mRNA level.