Валидация разработанной иммуноферментной тест-системы для лабораторной диагностики острого вирусного гепатита Е

Abstract

Цель исследования. Определить специфичность и чувствительность разработанного отечественного иммуноферментного набора «ИФА-анти-ВГЕ IgМ» для выявления иммуноглобулинов классов М к вирусу гепатита Е (ВГЕ) в сыворотке крови людей в реальных клинических условиях. Материалы и методы. Для определения чувствительности и специфичности использовались зарегистрированные промышленные образцы набора «ИФА-анти-ВГЕ IgМ», выпущенные УП «Хозрасчетное опытное производство Института биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси» (УП «ХОП ИБОХ НАН Беларуси») согласно ТУ BY 100185093.093-2023. На базе клинико-диагностической лаборатории УЗ «Городская клиническая инфекционная больница» г. Минска исследовались 214 сывороток крови пациентов с установленным наличием антител к вирусу гепатита А, вирусу гепатита С, антигеном вируса гепатита B, гиперлипидемией, антителами класса М к цитомегаловирусу и повышенным содержании ревматоидного фактора (РФ). Для определения чувствительности и специфичности набора исследовались 72 пробы сывороток в параллели с референсными наборами «Вектогеп Е-IgМ» («Вектор-Бест», Россия). Результаты. При использовании выпущенного в промышленных условиях набора «ИФА-анти-ВГЕ IgМ» (ТУ BY 100185093.093-2023) установлено отсутствие неспецифического перекрестного взаимодействия между сорбированными рекомбинантными полипептидами ORF2 и ORF3 ВГЕ 3-го генотипа и белками в пробах пациентов с антителами к гепатиту С, гепатиту А, антигеном вируса гепатита В, плазме крови с гемолизом и хилезом, образцах с повышенным содержанием РФ и наличием антител класса М к цитомегаловирусу. При оценке показателей чувствительности и специфичности на сыворотках крови в реальных клинических условиях установлены высокие показатели чувствительности – не менее 99 % и специфичности – не менее 99 %, что свидетельствует о возможности применения набора в практической деятельности лабораторий учреждений здравоохранения. Заключение. Зарегистрированная и выпускаемая первая отечественная тест-система «ИФА-анти-ВГЕ IgМ» для определения иммуноглобулинов класса М к ВГЕ в сыворотке крови людей методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) обладает высокими показателями аналитической надежности: чувствительность – не менее 99 %, специфичность – не менее 99 %.

Objective. To determine the specificity and sensitivity of the developed domestic enzyme-linked immunosorbent assay kit “ELISA-anti-HEV IgM” for detecting M class immunoglobulins to the hepatitis E virus (HEV) in human serum under real clinical conditions. Materials and methods. To determine the sensitivity and specificity, we used registered industrial samples of the “ELI-SA-anti-HEV IgM” kit, produced by Unitary Enterprise “Pilot Production of the Institute of Bioorganic Chemistry National Academy of Sciences of Belarus” in accordance with TU BY 100185093.093-2023. 214 blood serum samples from patients with established presence of antibodies to hepatitis A virus, hepatitis C virus, hepatitis B virus antigen, hyperlipidemia, class M antibodies to cytomegalovirus and increased content of rheumatoid factor were examined on the basis of the clinical and diagnostic laboratory of the healthcare institution “City Clinical Infectious Diseases Hospital” of Minsk. To determine the sensitivity and specificity of the set, 72 serum samples were examined in parallel with reference sets “Vecto gep E-IgM”. Results. When using the industrially released “ELISA-anti-HEV IgM” (TU BY 100185093.093-2023), the absence of non-specific cross-interaction between the sorbed recombinant polypeptides ORF2 and ORF3 of hepatitis E virus genotype 3 and proteins in samples of patients with antibodies to hepatitis C, hepatitis A, hepatitis B virus antigen, blood plasma with hemolysis and chylosis, samples with an increased content of rheumatoid factor and the presence of class M antibodies to cytomegalovirus. When evaluating sensitivity and specificity indicators on blood sera under real clinical conditions, high sensitivity indicators were established – at least 99% and specificity – at least 99%, which indicates the possibility of using the kit in the practical activities of laboratories of healthcare institutions. Conclusion. The registered and manufactured first domestic test system for the determination of class M immunoglobulins against hepatitis E virus (HЕV) in human blood serum “ELISA-anti-HEV IgM” by indirect enzyme immunoassay has high analytical reliability: sensitivity is at least 99%, specificity is at least 99%.